PBMNC分离效果

按照GMP生产规范和临床ACI要求分离外周血PBMNC，冷冻保存前细胞活性为99.6%±0.4%（n=5），与原始血样比，PBMNC回收率58.4%±6.52%（n=5）。

细菌和真菌培养阴性，实现全程无菌处理。MVE液氮罐

不同冷冻保护液对PBMNC的保护效果不同

PBMNC在－196℃液氮中储存24个月后复苏，镜下观察见细胞形态完整，圆形饱满，PBMNC复苏效率89.7%±3.82%，冻存液中含80%无血清培养基组和含80%自体血浆组比较，无统计学差异（P≥0.05）（表1）。

PBMNC冻存后诱导

AIL细胞的体外增殖及表型分析在倒置显微镜下观察显示，外周血单个核细胞呈悬浮生长，大小均匀，折光性一致，AIL经4d培养后部分细胞明显增大，可见细胞集落，胞核密度加强，体积增大，胞膜光滑，未见突起，新鲜与冻存后的单个核细胞诱导的AIL在形态和表型上无明显差别，增殖高峰期均在10－12d。MVE液氮罐

 

在培养过程中第14天，冻存组AIL细胞所占相对百分率由约2.3%上升约为10.4%，细胞数增加约1048倍，对照组AIL所占相对百分率由约2.3%上升为约11.3%，细胞数增加约1105倍。两组之间在细胞增长倍数与AIL所占百分比无显著差异（P＞0.05）。

（表1）

效应细胞的体外细胞毒活性

新鲜的与冻存的单个核细胞诱导的AIL对NK敏感（K562）或非敏感株细胞（HeLa）及贴壁或悬浮生长的肿瘤细胞均显示出很强的杀伤活性，且该活性随效靶浓度比的增加而增大，两组间的细胞毒活性无显著性差异（P＞0.05）（表2）。

图2：比较各种冷冻和对照组之间的增殖和细胞表型。A：所有表型培养前。B：所有在冷冻组表型培养14 天后。C：所有对照组表型培养14 天后，D：所有增殖。E：自体免疫淋巴细胞。MVE液氮罐