细胞复苏的原则-快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。MVE液氮罐

　　一、 实验前准备：

　　1、将水浴锅预热至37℃

　　2、用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

　　3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

　　二、取出冻存管：

　　1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

　　2、从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。

　　三、迅速解冻：

　　1、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。

　　2、约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。

　　四、平衡离心：

　　用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3min

　　五、制备细胞悬液：

　　1、吸弃上清液。

　　2、向离心管内加入10ml培养液，吹打制成细胞悬液。

　　六、细胞计数：

　　细胞浓度以5×105/ml为宜。

　　七、培养细胞：

　　将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养培养，换液的时间由细胞情况而定。

　　初学者易犯错误：

　　1、水浴锅未预热或者未预热到37℃。

　　2、水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。

　　3、离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。

　　4、一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。MVE液氮罐